——習(xí)近平總書記在致中國科學(xué)院建院70周年賀信中作出的“兩加快一努力”重要指示要求
——中國科學(xué)院辦院方針
語音播報(bào)
中國科學(xué)院生物物理研究所研究員章新政課題組在Journal of Structural Biology上,在線發(fā)表了題為Effect of charge on protein preferred orientation at the air-water interface in cryo-electron microscopy的冷凍電鏡方法學(xué)研究論文。該研究首次提出電荷相互作用是蛋白顆粒吸附于氣液界面并導(dǎo)致取向優(yōu)勢的主要因素,為克服氣液界面導(dǎo)致的冷凍制樣問題提供了新思路。
冷凍電鏡三維重構(gòu)需要蛋白質(zhì)在冷凍制樣時(shí)取向隨機(jī)地分布在非晶冰中,然而氣液界面常常導(dǎo)致蛋白質(zhì),尤其是可溶性蛋白質(zhì)在非晶冰中出現(xiàn)優(yōu)勢取向分布,嚴(yán)重情況下使得三維數(shù)據(jù)不完整,無法進(jìn)行重構(gòu)。該問題是目前單顆粒冷凍電鏡技術(shù)對蛋白質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析時(shí)易遇到的瓶頸問題。前期研究表明,氣液界面具有疏水性,可使處于氣液界面上的蛋白質(zhì)變性。因此,氣液界面往往被認(rèn)為通過疏水相互作用吸附部分變性的蛋白質(zhì),從而導(dǎo)致優(yōu)勢取向問題。
課題組博士生李不凡針對冷凍電鏡三維重構(gòu)中常見的蛋白質(zhì)優(yōu)勢取向問題開展機(jī)制研究,發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)吸附于氣液界面,其取向由氣液界面攜帶的電荷控制(如圖)。常規(guī)的冷凍制樣中氣液界面攜帶負(fù)電荷,負(fù)電荷對蛋白質(zhì)的吸附導(dǎo)致了蛋白質(zhì)分布的取向優(yōu)勢。研究還發(fā)現(xiàn),通過運(yùn)用帶正電的去污劑調(diào)制氣液界面的電荷性質(zhì),可以引入蛋白質(zhì)新的取向數(shù)據(jù),實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)取向問題的改善。該工作提出了電荷相互作用是許多蛋白質(zhì)吸附于氣液界面的主要因素,為克服氣液界面導(dǎo)致的冷凍制樣問題提供了新思路。
研究工作得到國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、國家自然科學(xué)基金委員會重點(diǎn)項(xiàng)目、中科院戰(zhàn)略性先導(dǎo)科技專項(xiàng)(B類)、中科院基礎(chǔ)前沿科學(xué)重點(diǎn)研究計(jì)劃項(xiàng)目的支持。
蛋白質(zhì)通過布朗運(yùn)動(dòng)至氣液界面附近,被由帶負(fù)電的氣液界面形成的勢阱捕獲的示意圖。捕獲的過程為蛋白質(zhì)的旋轉(zhuǎn)使其在勢阱中的能量最低。最低能量狀態(tài)決定優(yōu)勢取向分布。
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